一、項(xiàng)目背景介紹
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA組分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重復(fù)序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白質(zhì)組分具有RNA依賴的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA為模板復(fù)制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重復(fù)的富含G的DNA序列，這一序列在生物進(jìn)化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保護(hù)基因組DNA不被降解、防止染色體有害變異（染色體末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重復(fù)序列，端粒長度的穩(wěn)定和維持，以及染色體的整體空間取向、結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性。
在胚性細(xì)胞等增殖活躍的細(xì)胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟體細(xì)胞中端粒酶失活，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)永生性細(xì)胞株和腫瘤細(xì)胞株都呈端粒酶陽性，而在癌旁組織和正常組織中陽性率則很低，推測(cè)端粒酶可能是一個(gè)廣泛的腫瘤標(biāo)志物，端粒酶反應(yīng)超越了細(xì)胞的增殖限制，這可能是惡性腫瘤發(fā)生的一個(gè)先決條件。
傳統(tǒng)的端粒酶研究方法是以探針延伸為基礎(chǔ)測(cè)定端粒酶活性，需要大量的樣品材料，且檢驗(yàn)靈敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重復(fù)擴(kuò)增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。標(biāo)準(zhǔn)的TRAP法檢測(cè)是通過PCR擴(kuò)增端粒酶反應(yīng)的產(chǎn)物，使用放射性標(biāo)記，經(jīng)凝膠電泳后，通過放射自顯影顯示檢測(cè)結(jié)果。該方法相較于傳統(tǒng)的方法，檢測(cè)靈敏度有所提升，然而在檢測(cè)環(huán)節(jié)仍然操作繁瑣，且結(jié)果判讀存在主觀性。我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE檢測(cè)方法，提升了檢測(cè)效率（全流程：4-6h），結(jié)果判讀更加自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，且檢測(cè)靈敏度也有大幅度地提升。
二、端粒酶檢測(cè)方法及流程介紹
檢測(cè)端粒酶活性的常用方法：
2.1、直接檢測(cè)端粒酶（蛋白及RNA的結(jié)合復(fù)合物）的活性，檢測(cè)它是否可以延伸RNA模板，然后跑膠或者探針雜交，檢測(cè)端粒cDNA延伸的長度，以此來判斷端粒酶的活性高低。（TRAP法）
不足：經(jīng)典方法，但該方法需要放射性同位素標(biāo)記及制膠；重復(fù)性差、周期長、主觀判讀等。
2.2、間接檢測(cè)端粒酶組分（催化亞基的mRNA量）的表達(dá)量。
不足：本質(zhì)是檢測(cè)端粒酶的一個(gè)組分蛋白TERT的mRNA的表達(dá)量, 但是在多數(shù)細(xì)胞中，端粒酶催化亞基的表達(dá)很難檢測(cè)到,且mRNA的表達(dá)量并不一定能準(zhǔn)確反映端粒酶的活性強(qiáng)度，因端粒酶是一種由RNA及多種蛋白組成的復(fù)合物，TERT酶只是其中較為主要的一種蛋白。
三、HKGENE端粒酶檢測(cè)（TRAP+CE）流程：
3.1 樣本處理：端粒酶提取試劑盒，按照操作說明書，取適量細(xì)胞提取蛋白。-80°保存待用。
3.2 端粒擴(kuò)增：端粒酶擴(kuò)增試劑盒，按照操作說明，擴(kuò)增端粒重復(fù)序列。
3.3 端粒序列檢測(cè)：毛細(xì)管電泳檢測(cè)，按照操作說明進(jìn)行檢測(cè)。
3.4 端粒擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果分析： 按照SOP進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
3.5 報(bào)告整理：
四、CELL STR ID®端粒酶檢測(cè)委托檢測(cè)流程
4.1 電話或咨詢確認(rèn)相關(guān)信息（價(jià)格、樣本要求、周期、付款及合同）
4.2 送樣檢測(cè)，填寫電子訂單發(fā)送至微信：caijie037
4.3 檢測(cè)分析、報(bào)告整理、結(jié)果發(fā)送。
五、相關(guān)文獻(xiàn)：
5.1Telomeres and telomerase: three decades of progress JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.com
5.2 Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.3 Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
5.4 Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP) Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995
六、樣本要求及運(yùn)輸
細(xì)胞數(shù)量：≥1*10的6次方。1.5ml離心管
干冰運(yùn)輸。
七、端粒酶檢測(cè)意義及延伸服務(wù)：
端粒酶檢測(cè)意義：細(xì)胞成瘤性體外評(píng)估、細(xì)胞傳代穩(wěn)定性評(píng)估、iPSC殘留檢測(cè)、端粒酶抑制劑效果評(píng)估
延伸服務(wù)：端粒酶檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證、提供配套自檢方案（儀器、試劑、軟件、技術(shù)培訓(xùn)），便于用戶實(shí)現(xiàn)自主可控監(jiān)測(cè)。同一套儀器可實(shí)現(xiàn)STR鑒定、種屬鑒定、菌種鑒定、端粒酶檢測(cè)、HLA分型、宿主細(xì)胞DNA片段殘留及片段大小分析等。
